PhytAlert Turf eta qPCR teknika: soropilaren gaixotasunaren gakoa
ARGAZKIA · TILOOM
Hamarkada luzeak dira qPCR teknika oso zabalduta dagoela eta ezinbestekoa dela mediku zein biologia laborategientzat. Gaur egun, mundu osoan ezaguna da COVID-19 detektatzeko teknika gisa, eta soropil osasuntsuaren gakoa da: soropila aztertzeko modu berritzailea, Tiloomek soropilaren industrian aurkezten duena PhytAlert Turf kit berritzailearekin (Microgaia Biotech enpresarena).
Gure soropilen osasuna aztertzeko modu berriak irekitzen dira qPCRri esker.
Gure soropilen osasuna munduan aztertzeko modu berriak irekitzen dira, gure Phytfieldlab kit berriarekin praktikara eramandako teknologiari esker
Teknika hau DNA molekulen anplifikazio esponentzialean oinarritzen da, DNA polimerasa termoegonkorra entzima erabiliz. Bere siglak PCR dira: Polymerase Chain Reaction (polimerasaren kate-erreakzioa). Orain, eremu guztiek azkar eta zehaztasunez diagnostikatzeko moduko teknika eskuragarria da.
Orain teknika hau aplikatu dezakegu gure kirol-gainazalen egoera fitosanitarioa ezagutzeko; hau da, mikroorganismo patogenoak identifika ditzakegu, bai landarean bai lurzoruan, gaixotasuna sor dezaten baino lehen. Horri esker, greenkeeperrak erabili beharreko tratamendu motari buruzko erabakiak har ditzake, aplikazioaren benetako beharra balioetsiz, kostuak aurreztuz, tratamenduak optimizatuz eta konposatu kimiko horien presentzia lurzoruan murriztuz.
PhytAlert Turf KITarekin soropila azkar eta zehaztasunez diagnostika dezakezu.
Abantaila nagusiak hauek dira:
- Kontrola eta jarraipena: lehen sintoma fitopatogenikoak agertu baino lehen aurreratzeko aukera ematen du.
- Prebentzioa: lurzoruaren egoeraren azterketa soropila edo edozein laboreren ezarpena egin baino lehen.
- Patogenorik gabeko zelai-zatien ziurtagiria, gure estadioetan edo greenetan instalatu aurretik.
- Gaixotasunen diagnostikoa soropil sintomatikoan zein asintomatikoan: tratamendu bideratuak eta eraginkorrak, espektro zabaleko produktuen erabilera saihestuz.
- Hautemate-eremu zabala (substratua, landarea, ura, haziak).
- Mikroorganismoen hautemate eta kuantifikazioa fitosanitarioekin tratamendua egin aurretik eta ondoren, haien eraginkortasuna egiaztatzeko.
- Mikroorganismo onuragarrietan oinarrituta formulatutako produktuen kalitate-kontrola.
PCR baten eta qPCR baten arteko aldeak
PCR teknika konbentzionalean, DNA anplifikatu den egiaztatu nahi bada, eta, beraz, interesatzen zaigun mikroorganismoa laginean dagoen ala ez jakiteko, elektroforesia izeneko beste teknika gehigarri bat egin behar da. Hala ere, elektroforesia eginda eta DNA anplifikatu dela egiaztatuta ere, inoiz ezin da anplifikatu dugun DNAren kuantifikaziorik egin; hau da, ezin dugu jakin aztertu nahi dugun mikroorganismoaren kantitatea handia ala txikia den.
PCR teknikaren bertsio bat dago, denbora errealeko PCR edo qPCR izenekoa, eta horrek mikroorganismo horien existentzia goiz hautemateaz gain, haien kuantifikazioa denbora errealean, berehala, egiteko aukera ematen du. Hala, qPCR teknikak abantaila argia du PCR konbentzionalaren aldean, horren bidez mikroorganismo patogenikoen infekzio-maila erreala egiazta baitezakegu, eta soropilean duten presentzia garrantzitsua den ala ez jakin.
qPCRREN FUNTZIONAMENDUA
qPCR teknika bat da, molekula horren kantitate txiki batetik abiatuta DNA bikoizteko aukera ematen duena; molekula hori DNA molde gisa ezagutzen da. Hori posible da entzima bati esker: DNA polimerasari. Teknika honek DNAren anplifikazioaren jarraipena egiteko aukera ematen du, erreakzioko osagaietako bati lotutako markatzaile fluoreszente batek sortutako seinaleari esker; seinale horrek sortzen ari den DNA kantitatearekiko proportzionala den intentsitateko argi-seinalea emango du. Hala, zenbat eta DNA gehiago egon, orduan eta argi gehiago igorriko du markatzaile fluoreszenteak.
Igorritako seinalea software batek atzematen du, eta irakurketak anplifikazio-erreakzioaren ziklo osoa irudikatzen duen kurba batean biltzen ditu.
Ekipo honi Termozikladore deritzo, eta, izenak dioen bezala, DNAren anplifikazio-erreakzioa gauzatzeko behar diren tenperatura-zikloak egiteaz arduratzen da. Ezarritako tenperatura-zikloak 40 aldiz inguru errepikatzen dira, eta horietako bakoitzean urrats hauek gertatzen dira:
- Zikloaren 1. zatia, 95º-ko tenperatura. DNA moldearen molekula desnaturalizatzen da
- Zikloaren 2. zatia, 60º-ko tenperatura. Hasle-sekuentziak (primerrak) DNA moldearen molekulari lotzen zaizkio
- Zikloaren 3. zatia, 72º-ko tenperatura. DNA polimerasak DNA katea luzatzen du, aurreko urratsean katera lotu diren hasle-sekuentzietatik abiatuta, dNTPak erabiliz.
Zure zelairako dagoen diagnosi-teknologiarik aurreratuena.
Termozikladoreak egindako tenperatura-ziklo bakoitzean, DNA kate bakoitzaren kopia bat sortzen da, honela: DNA molekula berri batekin hasiz gero, 2 DNA kate lortuko ditugu 1. zikloan, 4 DNA kate 2. zikloan, 8 DNA kate 3. zikloan, eta horrela azken zikloraino, non milioika DNA kate lortuko ditugun.
qPCR erreakzio batean DNAren anplifikazioa gertatzen denean, denbora errealean ikus daiteke DNA molekulen bikoizketa nola gertatzen den. Hori gertatzen da erreakzioko osagaietako bat, zunda, konposatu fluoreszente batekin markatuta dagoelako, eta konposatu horrek DNA katea bikoiztean soilik igorriko duelako argia. Hala, zenbat eta DNA kate gehiago bikoiztu, orduan eta argi gehiago igorriko du markatzaileak, eta termozikladorearen sentsoreek jasoko dute, eta azkenik softwareak interpretatuko du.
Konposatu fluoreszenteak sortutako argia modu esanguratsuan ikusten hasten denean (softwareak kurba baten bidez adierazita), DNA moldearen DNAren kopia nahikoak egin direla esan nahi du, hautemateko modukoak izan daitezen. Une horri hautemate-atalase deritzo, eta horrek esan nahi du ziklo horretatik aurrera DNA moldearen hautemate bat gertatu dela. DNA molde hori mikroorganismo batetik badator, mikroorganismo horren hautemate bat gertatu dela esan daiteke.
Nola interpretatzen dut qPCR batek emandako informazioa?
qPCR erreakzio batetik lortzen den informazioa aldatu egiten da erreakzioa zergatik egin den.
Landare-mikroorganismo patogenoak hautemateko kasuan, bilatzen den informazioa patogeno horiek DNAren bidez hautematea da. Oso erabilgarria da, halaber, aztertutako laginean dagoen mikroorganismoaren kantitatea ezagutzea.
Bilatutako mikroorganismoaren DNArik badago, qPCR erreakzioan zehar denbora errealean ikusi ahal izango dugu bere DNAren bikoizketa gertatzen den, markatzaile fluoreszenteak igorritako seinaleari esker. Hautemate-atalasean anplifikazio esponentzialeko lerro bat agertuko da; lehen esan dugun bezala, une horretan esan daiteke mikroorganismoaren presentzia dagoela laginean.
Hautematea denbora gutxian gertatzen bada, hau da, ziklo goiztiarretan, mikroorganismo kantitate handiagoa dugula esan nahi du hautematea ziklo berantiarretan gertatzen denean baino. Hori honetan oinarritzen da: DNA kopia kopuru handiagotik abiatzen bada, eta, beraz, mikroorganismo kantitate handiagotik, lehenago iritsiko da termozikladorearen sentsoreek hauteman ahal izateko behar diren DNA kopietara.
Tiloomek, Microgaiarekin batera, kirol-erabilerako soropilaren sektorea teknifikatu nahi du, eta gure PhytAlert Turf KITarekin urrats bat gehiago eman ahal izango duzu landareen osasunean.
